Основным методом лабораторной диагностики НПС является нагрузочный тест с филипином (рис. 8). При окрашивании культуры клеток фибробластов наблюдаются интенсивные флюоресцирующие области, сконцентрированные вокруг ядра клетки, которые соответствуют накоплению неэстерифицированного холестерина. Это исследование проводится только в небольшом числе специализированных лабораторий. Дополнительными биохимическими маркерами могут быть: снижение активности сфингомиелиназы в лейкоцитах крови (20-30% от нормы), повышение активности маркерного фермента лизосом - хитотриозидазы в плазме крови. ДНК-диагностика является наиболее предпочтительным методом верификации диагноза. Описано несколько относительно распространенных мутаций в гене NPC1, которые локализованы в 20-22 экзонах гена NPC1, но в большинстве случаев требуется полное секвенирование генов NPC1 и NPC2 для выявления мутаций. Информативность такого тестирования составляет около 94%. Перспективным методом биохимической диагностики является определение производных холестерина. В ряде работ было показано, что в клетках и плазме крови пациентов с болезнью НПС происходит накопление холестан-3,5,6-триола и 7-кетостерола. Уровень этих соединений не повышается в крови у пациентов с другими нейродегенеративными заболеваниями и ЛБН. Также на животных моделях НПС было показано, что концентрация этих соединений снижается на фоне лечения. Определить эти соединения можно
&hide_Cookie=yes)
Рис. 8. Тест с филипином: А - норма; В - НПС (характерное перинуклеарное накопление липидов)
с помощью метода газовой хроматографии масс-спектрометрии (ГХМС) или высокоэффективной жидкостной хроматографии тандемной масс-спектрометрии (ВЭЖХ-МС/МС). Последний метод является предпочтительным, поскольку позволяет определять эти соединения в небольшом количестве биологического материала и не требует длительной пробоподготовки, как при ГХ-МС. Возможно, что уже в ближайшее время данный методический подход будет применяться для первого этапа диагностики НПС.