КАЧЕСТВО СРЕЗОВ
Следует уделять особое внимание качеству срезов. Используйте тонкие (4 um), прочно закрепленные на предметном стекле срезы.
Неровные срезы, имеющие плохой контакт с предметным стеклом, окрашиваются неравномерно и имеют значительное фоновое окрашивание.
ФИКСАЦИЯ
Хорошее качество фиксации (качественный фиксирующий раствор, оптимальная температура, рН, время) дает лучшие результаты.
Неудовлетворительные условия фиксации влияют на результаты окрашивания и могут привести к проблемам в интерпретации результатов.
АДГЕЗИЯ СРЕЗОВ
Нельзя использовать адгезивы на основе белков (клей, крахмал, желатин), следует пользоваться предметным стеклом со специальным покрытием (poly-L-lyzin).
Адгезивы на основе белков могут блокировать заряженную поверхность предметного стекла. Это вызывает неполную адгезию среза и ведет к неравномерному окрашиванию препарата вследствие проникновения реагентов под срез.
ДЕПАРАФИНИЗАЦИЯ И РАСПРЕДЕЛЕНИЕ РЕАГЕНТОВ ПО СРЕЗАМ
Следует тщательно депарафинировать и отмывать препараты перед окрашиванием. Реагенты на стекле необходимо распределять равномерно по поверхности среза. Это обеспечивает получение сопоставимых результатов.
Неполная депарафинизация или неравномерное распределение реагентов на поверхности образца могут быть причиной неравномерного окрашивания препаратов.
ВЫБОР ЗОНДОВ
Следует тщательно выбирать зонды с учетом их чувствительности и специфичности. Не следует в качестве критерия выбора зондов основываться на их цене.
ИЗУЧЕНИЕ СПЕЦИФИКАЦИИ
Следует модифицировать протокол под каждую новую партию зондов сообразно прилагаемой к ним спецификации. Тщательный контроль температуры и времени обеспечит наилучшие условия для гибридизации.
Производители зондов часто модифицируют продукцию, что влечет за собой изменение протокола окраски. Недоучет этих изменений приведет к неудовлетворительному результату окраски.