Тема «Рекомбинантные белки» посвящена методологии генной инженерии по созданию штаммов-продуцентов видоспецифических белков человека, которые в дальнейшем применяют в качестве лекарственных препаратов. Рассмотрен препаративный метод разрушения клеток Escherichia coli, содержащих внедренную плазмидную ДНК, последующее ее отделение от содержимого клеточного аппарата и идентифицирующий электрофоретический анализ полученной плаз-мидной ДНК в агарозном геле.
Цель изучения темы: предлагаемые к практическим занятиям материалы по биотехнологии позволяют студентам ознакомиться с некоторыми аспектами деятельности генных инженеров, занятых как в области фундаментальных исследований биотехнологии, так и в производственной практике.
Авторы данного руководства ставили перед собой задачу первичного ознакомления студентов фармацевтического факультета ПМГМУ с основными методами работы с плазмидной (векторной) ДНК, которые позволяют отнести эти приемы генной инженерии к нанобиотехнологиям.
В биотехнологии значительный объем исследований, использующих генно-инженерные приемы, был выполнен на клетках прокариотиче-ской системы E. coli, поэтому первичное знакомство студентов с этой областью начинают с выполнения лабораторного проекта, использующего этот микроорганизм в качестве клетки-хозяина. Система «вектор-хозяин» работает в практикуме с использованием плазмидной ДНК (например, плазмиды pBR 322) и штамма JM 109 E. coli. В лабораторном проекте на системе «вектор-хозяин» студенты учатся получать компетентные клетки, трансформировать их, наращивать клеточный материал для выделения и очистки плазмидной ДНК, ставить эксперименты для рестрикционного анализа плазмиды.
Рассмотрение такого широкого круга вопросов с использованием прокариотической системы E. coli предлагают тем студентам, которые в дальнейшем будут выполнять дипломные и курсовые работы в Институте биоорганической химии (ИБХ РАН), и тогда данному практикуму должно предшествовать серьезное и подробное лекци-