Частная бактериология

Занятие № 11. Грамположительные кокки

Знание особенностей стафилококков, стрептококков необходимо для правильного проведения лечебно-профилактических мероприятий при различных нозологических формах заболеваний.

Цель занятия

Освоение микробиологических методов диагностики стафилококковых, стрептококковых инфекций.

Студент должен знать

1. Схемы микробиологической диагностики стафилококковых и стрептококковых заболеваний.

2. Диагностические, профилактические и лечебные препараты, применяемые при стафилококковых и стрептококковых заболеваниях.

Студент должен уметь

1. Выполнить посев гноя и крови на кокковую флору.

2. Применить схему микробиологической диагностики стафилококковых и стрептококковых заболеваний.

3. Применить диагностические, профилактические и лечебные препараты, используемые при заболеваниях, вызванных данными микроорганизмами.

Стафилококки

Представители рода Staphylococcus играют важную роль в инфекционной патологии человека. Практически любой представитель рода Staphylococcus способен вызывать гнойно-воспалительный процесс, однако наиболее часто в таком качестве выступают S. aureus, S. epidermidis, S. hominis, S. capitis, S. simulans.

Материалом для бактериологического исследования (схема 2) является раневое отделяемое, кровь, спинномозговая жидкость, рвотные массы, промывные воды желудка, пунктаты из ограниченных очагов воспаления (абсцессы и др.), мокрота, мазки со слизистых оболочек носоглотки и т.д.

Стафилококки под микроскопом напоминают гроздья фиолетового винограда (рис. 22). На кровяном агаре стафилококки образуют гемолитические и негемолитические непрозрачные колонии средних размеров белого или золотистого цвета, гладкие, круглые, с ровными краями, диаметром 1–3 мм.

Схема 2. Диагностика стафилококковых инфекций. ЖСА - желточно-солевой агар; МЖСА - молочно-желточно-солевой агар

Рис. 22. Стафилококки

Колонии стафилококков могут быть окружены зоной гемолиза и в большинстве случаев обладают золотистым, палевым или лимонно-желтым пигментом. На среде ЖСА вырастают колонии, окруженные видимым при косом освещении радужным венчиком.

На элективно-дифференциальных средах вырастают, как правило, только колонии стафилококков. На ЖСА вокруг колоний выявляется продукция лецитиназы. На маннит-полимиксиновом агаре, инкубированном в анаэробных условиях, в случае ферментации маннита колонии стафилококков и среда вокруг них окрашиваются в желтый цвет.

Из части колонии выросших на плотной питательной среде микроорганизмов готовят мазок на предметном стекле, окрашивают его по Граму и микроскопируют.

Идентификация стафилококков

1. Проба на каталазу

Чистую культуру изучаемого штамма помещают с помощью стеклянной палочки в каплю 3–10% раствора перекиси водорода на предметном стекле и растирают круговыми движениями. В положительных случаях наблюдают выделение пузырьков газа.

2. Реакция плазмокоагуляции

Петлю суточной агаровой культуры стафилококка суспендируют в 0,5 мл разведенной 1:5 цитратной кроличьей плазме. Результат регистрируют через 1, 2, 4 или 18 ч инкубации проб в термостате при температуре 37 °С. Появление на дне пробирки студнеобразного сгустка свидетельствует о наличии у изучаемого штамма фермента плазмокоагулазы.

3. Определение ДНКазы

Суточную агаровую культуру стафилококка засевают коротким штрихом на поверхность содержащего ДНК мясопептонного агара. После инкубации посевов в термостате при температуре 37 °С в течение 18–24 ч поверхность агара заливают 1N раствором соляной кислоты. Вокруг продуцирующих ДНКазу колоний образуется зона просветления.

4. Определение фосфатазы

Изучаемую культуру засевают бляшками на чашку с фенолфталеиновым агаром. После инкубации их в термостате при температуре 37 °С в течение 18–24 ч выросшие колонии обрабатывают парами аммиака. При положительной реакции наблюдается розовое окрашивание колоний.

5. Ферментация мочевины и углеводов

Культуру стафилококков засевают на питательную среду, содержащую 1% соответствующего субстрата и индикатор.

6. Определение ацетоина

Суточную агаровую культуру стафилококка засевают на буль-
он Кларка. После инкубации при температуре 37 °С в течение
18–24 ч в пробирки с культурой добавляют небольшое количество 5% спиртового раствора альфа-нафтола и 40% NaOH. После повторной инкубации в течение 1 ч учитывают результат.

На основании представленных в табл. 6 признаков определяют вид стафилококков.

Таблица 6. Идентификация стафилококков

+ — 90% и более положительных штаммов;

– — 90% отрицательных штаммов;

d — 11–89% позитивных штаммов;

( ) — замедленная реакция.

Стрептококки

Род стрептококков включает несколько десятков видов. Стрептококки — неспорообразующие грамположительные бактерии шаровидной или овоидной формы диаметром 0,6–1,0 мкм, неподвижные. В мазках из патологического материала образуют длинные цепочки (рис. 23).

Рис. 23. Стрептококки

Патогенные стрептококки образуют капсулу, являются факультативными анаэробами, но имеются и строгие анаэробы. Для культивирования используют сахарный бульон и кровяной агар. В сахарном бульоне рост придонно-пристеночный. На плотной среде образуют мелкие колонии трех типов: мукоидные, шероховатые и гладкие. По характеру роста на кровяном агаре различают a-гемолитические, b-гемолитиче­ские и негемолитические стрептококки.

Стрептококки ферментируют глюкозу, мальтозу, сахарозу и другие углеводы с образованием кис­лоты без газа (кроме S. kefir), не свертывают молоко (кроме S. lactis), не обладают протео­литическими свойствами (кроме некоторых энтерококков). По антигенному составу клеточной стенки стрептококков различают 20 серологиче­ских групп (А–Y). Внутри серогрупп различают серовары. Дифференцация стрептококков от энтерококков представлена в табл. 7.

Таблица 7. Свойства стрептококков

Пневмококки

Пневмококк (вид Streptococcus pneumoniaе) как представитель рода Streptococcus имеет ряд характерных для других стрептококков свойств.

Пневмококк является грамположительным диплококком, обычно ланцетовидным, имеющим полисахаридную капсулу, с размером клеток 1×0,2 мкм (рис. 24). Спор не образует, неподвижен.

Рис. 24. Пневмококки