Для изучения изменения в коже после папульного введения препарата Meso-Wharton P199 мы провели клинико-лабораторное исследование.
Больная К. (история болезни № 35294047) обратилась по поводу абдоминоптоза для проведения абдоминопластики. После информированного согласия пациентке за 1,5 мес до операции было проведено клиническое исследование (рис. 8.1, 8.2).
В кожу заведомо удаляемого кожно-жирового лоскута вводили:
- физиологический раствор (контрольная группа исследований);
- препарат Meso-Wharton P199 (в правую часть лоскута);
- раствор ГК (в левую часть лоскута).
Препараты вводили по следующей схеме.
- Вводили ряд папул препарата Meso-Wharton P199, ГК и физиологического раствора.
- Через 1 нед в 1-й ряд вводили повторно препарат Meso-Wharton P199 справа и ГК — слева. Формировали 2-й ряд первичного введения препаратов.
- Через 1 нед в 1-й ряд вводили препараты в 3-й раз, во 2-й ряд — во 2-й раз и формировали 3-й ряд введения препаратов.
- Через 1 нед в 1-й ряд вводили препараты в 4-й раз, во 2-й ряд — в 3-й раз, в 3-й ряд — во 2-й раз и формировали 4-й ряд препаратов.
- В качестве контроля планировали взять на исследование участок кожи в норме; участок кожи, в который проведен только вкол иглы для исследования эффекта травмы; участок кожи, в который введен физиологический раствор.
Через 1 мес после начала эксперимента провели абдоминопластику, иссекли избыточный кожно-жировой лоскут и взяли по 12 препаратов из каждой зоны введения для гистологического и гистохимического исследования. Послеоперационный период протекал без особенностей. Рана зажила первичным натяжением. В отдаленном периоде пациентка результатами операции была довольна. Проведенное клиническое исследование не оказало
никакого отрицательного воздействия на течение послеоперационного периода.
В препарате после однократного введения ГК через 1 нед отмечались очаговое умеренное увеличение матрикса, коллагеновые, эластические волокна и единичные фибробласты нормального строения (рис. 8.3).
Через 2 нед после однократного введения ГК отмечались: очаговая умеренно выраженная гипертрофия коллагеновых волокон сетчатого слоя, очаговое увеличение матрикса, умеренное число фибробластов нормального строения веретеновидной формы (рис. 8.4).
Через 2 нед после двукратного (с промежутком в 2 нед) введения ГК отмечались очаговая гипертрофия коллагеновых волокон глубоких слоев сетчатого слоя слабой степени выраженности, диффузное увеличение матрикса в объеме, препарат с максимальным увеличением площади матрикса по отношению к площади коллагеновых и эластических волокон, умеренное число фибробластов нормального строения веретеновидной формы.
Таким образом, введение ГК влияет в основном на увеличение площади матрикса и никак не влияет на коллагеновые и эластиновые волокна.
Через 1 нед после однократного введения препарата Meso-Wharton P199 (рис. 8.5) в сетчатом слое была отмечена выраженная гипертрофия коллагеновых волокон с их более плотным расположением в объеме дермы, а также препарат с максимальным объемом волокон по отношению к матриксу.
Через 2 нед после однократного введения препарата Meso-Wharton P199 отмечалась очаговая умеренно выраженная гипертрофия коллагеновых волокон сетчатого слоя.
Через 2 нед после двукратного (с промежутком в 2 нед) введения препарата Meso-Wharton P199 (рис. 8.6) отмечалось более плотное расположение коллагеновых и эластических волокон по всему объему, часть волокон была с выраженной и умеренно выраженной степенью гипертрофии.
Таким образом, с помощью этапного гистологического исследования 12 препаратов нам удалось установить, что максимальная площадь волокон по отношению к матриксу наблюдалась в образцах после введения пептидов, что определялось увеличением толщины и плотности коллагеновых волокон (рис. 8.7). Показано, что после введения ГК наблюдается максимальная площадь матрикса по отношению к площади коллагеновых и эластических волокон.
Рис. 8.7. Гистологическая картина участка кожи через две недели после двукратного введения препарата гиалуроновой кислоты (слева) и препарата Meso-Wharton P199 (справа)
По результатам ИГХ-исследования 12 препаратов из каждой зоны введения наиболее показательными маркерами явились проколлаген и транскрипционный фактор АР-1.
В исследуемой группе максимальное значение оптической плотности экспрессии проколлагена (показатель, характеризующий интенсивность ИГХ-реакции в препарате, который позволяет судить о количестве исследуемого вещества в нем) наблюдалось после двукратного введения препарата Meso-Wharton P199 и составляло 0,285 у.е., также оно было высоким в других препаратах — 0,260, 0,273 и 0,278 у.е. соответственно (рис. 8.8–8.11). Минимальные значение оптической плотности были в образцах № 1 (норма) и после введения ГК — 0,175 и 0,194 у.е. соответственно, то есть после введения препарата Meso-Wharton P199 количество коллагена в коже увеличилось на 61,4–68%. По-видимому, в этом заключается эффективность использования препарата для улучшения заживления кожной раны при формировании нормотрофического рубца (р ≤0,5).
При исследовании маркера пролиферации клеток показано, что наиболее интенсивное деление фибробластов кожи наблюдалось после введения препарата Meso-Wharton P199, тогда как делящиеся клетки практически отсутствовали после инъекций ГК.
Таким образом, гистологическая и ИГХ-картина свидетельствует, что инъекционное введение препарата Meso-Wharton P199 оказывает позитивное воздействие на кожу по сравнению с контрольными образцами.
- Пролифераторная активность клеточного пула возрастает.
- Увеличивается содержание волокнистых структур дермы (по сравнению с контролем и ГК).
- Отмечен динамический рост содержания белка проколлагена, что свидетельствует о процессе коллагеногенеза.
- Прослеживается положительная тенденция в динамике лабораторных показателей в зависимости от кратности введения и сроков экспозиции Meso-Wharton P199 в тканях.
- Единственным положительным результатом использования ГК является увеличение площади межклеточного матрикса.