Приложение 1. Микроскопическая диагностика лямблиоза
Состав консерванта Сафаралиева: метилтиониния хлорид (Метиленовый синий♠) — 0,2 г, 2% раствор сернокислого цинка℘ — 82,5 мл, формальдегид (Формалин♠) концентрированный — 10 мл, уксусная кислота крепкая — 5 мл, фенол кристаллический — 2,5 г. Реактивы смешивают в указанном порядке. Фенол предварительно расплавляют на водяной бане.
Консервант разливается во флакончики до половины их объема. Подлежащий исследованию материал от каждого больного немедленно эмульгируется отдельной деревянной палочкой в отдельном флакончике в количестве, составляющем примерно 1/3 объема консерванта. Простейшие окрашиваются уже через 5–10 мин и при необходимости могут сохраняться в течение нескольких месяцев. Для исследования каплю осадка со дна пробирки с помощью пипетки помещают на предметное стекло и покрывают покровным стеклом. Микроскопируют при увеличении 10×60 или 10×40. Иммерсионную систему используют в случае необходимости изучить объект более детально. Консервировать можно как оформленный кал, так и жидкие патологические субстраты. В смеси длительно сохраняются и хорошо окрашиваются не только цисты, но и вегетативные формы амеб и других простейших.
Состав консерванта Берроуза: натрия хлорид — 0,7 г, формальдегид (Формалин♠) концентрированный — 5,0 мл, этанол (спирт этиловый 96%♠) — 12,5 мл, фенол кристаллический — 2,0 г, вода дистиллированная — до 100 мл. Консервирование в нем производится таким же образом, как и в растворе Сафаралиева. Простейшие сохраняются в этом консерванте не дольше одного месяца. Для микроскопического исследования каплю осадка эмульгируют на предметном стекле в капле красящего раствора и покрывают покровным стеклом. В качестве красящего раствора используется 0,01% раствор тионина℘, азура℘ или метилтиониния хлорида (Метиленового синего♠).
Состав консерванта Турдыева: 0,2% водный раствор натрия нитрита — 80 мл, раствор йода + [калия йодида + глицерола] (Люголя♠) — 8 мл, формальдегид (Формалин♠) концентрированный — 10 мл, глицерин — 2 мл.
Метод обогащения. При скудном содержании простейших в кале они могут быть не обнаружены при микроскопировании нативных мазков и мазков с раствором йода + [калия йодида + глицерола] (Люголя♠). В этих случаях рекомендуется применить формалин-эфирное обогащение. Для этого кусочек кала величиной с горошину тщательно эмульгируют деревянной палочкой в центрифужной пробирке в 6 мл 10% раствора формальдегида (Формалина♠) на изотоническом растворе. В пробирку добавляют 2 мл эфира, закрывают резиновой пробкой, энергично встряхивают в течение 1 мин, а затем центрифугируют 3 мин при 1500 об/мин или 1 мин при 2500 об/мин. После центрифугирования эмульсия разделяется на четыре слоя: окрашенный в желтый цвет верхний эфирный слой, слой фекалий (фекальная пробка), затем слой формалина и под ним осадок, в котором содержатся цисты простейших. Деревянной палочкой (отдельной для каждой пробы) слой фекалий отделяют от стенок пробирки и все содержимое ее, за исключением осадка, сливают. Наклонив пробирку отверстием книзу, быстро протирают ее стенки ватным или марлевым тампоном, стараясь удалить возможно большее количество жидкости, но не затрагивая осадок. Переворачивают пробирку отверстием вверх, переносят отдельной пипеткой осадок на предметное стекло, эмульгируют его в капле раствора йода + [калия йодида + глицерола] (Люголя♠) и исследуют по обычной методике.