Правила сбора и доставки материала для микологического исследования
От правильности взятия материала во многом зависит эффективность лабораторного анализа. При отрицательном результате исследований всегда следует рассматривать вопрос о повторном взятии материала.
Основные причины ложноотрицательных результатов:
- недостаточно материала;
- неправильное взятие;
- использование накануне забора противогрибковых препаратов, мазей;
- неправильная доставка материала в лабораторию, высушенный материал.
Ликвор собирают с соблюдением всех правил асептики. Оптимальным объемом для микологического исследования считают 3–5 мл ликвора. Образцы должны быть доставлены в лабораторию как можно быстрее и обработаны в кратчайшие сроки. При невозможности немедленной доставки ликвор хранят при комнатной температуре или инкубируют при 35 °С.
Кровь собирают из локтевой вены в количестве 5–10 мл в жидкую среду Сабуро (1:5) или промышленно изготовленные среды для микологического исследования культур крови.
Мокроту собирают в стерильную банку натощак, утром, после пробуждения, предварительно почистив зубы, прополоскав рот. Доставка в лабораторию необходима в течение 2 ч. При невозможности быстрой доставки образцы хранят в холодильнике при температуре 4 °С не более 24 ч.
Мочу, среднюю утреннюю порцию, собирают в стерильную посуду после тщательного туалета наружных половых органов. Материал доставляют в лабораторию в течение 2 ч. При невозможности быстрой доставки хранят при комнатной температуре в течение 1–2 ч или в холодильнике не более 1 сут.
Отделяемое слизистых оболочек (мазки из зева, носа, конъюнктивы, влагалища и др.), ран, свищей собирают стерильным ватным тампоном.
Биопсийный материал помещают в стерильную посуду.
Пунктаты абсцессов собирают в стерильные пробирки.
Соскобы с кожи, ногтей. Материал отбирают с помощью скальпеля, пинцета в местах инфицирования, особенно на границах здоровой и пораженной кожи. При взятии соскобов кожа пациентов должна быть чистой, без присутствия мазей. У пациентов с подозрением на онихомикоз образцы собирают с помощью ножниц, тупого скальпеля, соскребая пораженную часть всех слоев ногтя. Для удобства образцы кожи и ногтей можно собирать над черной бумагой, на которой отчетливо видно количество собранного материала и которую после запечатывания доставляют в лабораторию. При отсутствии черной бумаги материал может быть собран в чашки Петри.
Волосы и шерсть вместе с чешуйками извлекают пинцетом.
Посев материала
Ликвор центрифугируют в течение 5 мин со скоростью 1500 оборотов/мин, осадок используют для микроскопии и посева. Для микроскопии окрашивают тушью, по Граму, альциановым синимпо Моури. Посев осуществляют на три чашки [агар Сабуро или Сабуро-декстрозный агар (СДА)], остатки переносят в жидкую среду Сабуро. Инкубируют две чашки при температуре 37 °С и одну чашку и жидкое Сабуро — при 28 °С. Посевы просматривают ежедневно. Длительность инкубации — не менее 10 дней.
Кровь. Нативную кровь засевают на агар Сабуро, СДА, в жидкую среду Сабуро (1:5) или промышленно изготовленные флаконы для исследования грибов в культурах крови. Инкубируют при температуре 28 и 37 °С. Посевы просматривают ежедневно. Длительность инкубации — не менее 10 дней.
Мокроту, бронхоальвеолярный лаваж засевают на агар Сабуро, СДА с хлорамфениколом (Левомицетином♠) и гентамицином. Инкубируют посевы при температуре 28 и 37 °С. Перед посевом микроскопируют нативные и окрашенные препараты.
Мочу центрифугируют в течение 15 мин со скоростью 1500 оборотов/мин, сливают надосадочную жидкость. Осадок микроскопируют в калия гидроксиде (KOH), по Граму, PAS, и засевают 0,1 мл осадка на агар Сабуро с гентамицином, хлорамфениколом, СДА. Инкубируют посевы при температуре 28 и 37 °С.
Отделяемое слизистых оболочек, наружного слухового прохода, ран засевают тампоном на агар Сабуро с гентамицином, хлорамфениколом (Левомицетином♠), вращая всей поверхностью тампона по поверхности питательной среды. Инкубируют посевы при температуре 28 и 37 °С.
Кожные и ногтевые чешуйки переносят в скошенный сусло-агар, СДА, тщательно прижимая их к агару в 2–3 точках. Инкубируют посевы при температуре 28 и 37 °С. Предварительно микроскопируют на наличие Malassezia и элементов других грибов. При предварительном диагнозе «отрубевидный лишай» посевы производят на среду Диксона. При подозрении на дерматофиты возможно использование агара Сабуро с циклогексимидом, подавляющим рост многих плесневых грибов, Candida spp., Cryptococcus spp.
Кусочки тканей и органов (биопсия, аутопсия) отпечатывают на поверхность агара Сабуро, СДА в разные точки. Одновременно кусочки тканей помещают в жидкую среду Сабуро. Инкубируют посевы при температуре 28 и 37 °С.
Одной из ошибок, приводящей к ложноотрицательным результатам при микологических исследованиях, считают недостаточную длительность инкубации. Длительность инкубирования в зависимости от исследуемого материала и предполагаемого возбудителя представлена в табл. 2.1.